Иценков Wrote:
Как я понимаю - выделение вируса и секвенирование - это два разных процесса.
ЭЭЭ стесняюсь спросить.. вы как выделение вируса видите в натуре? Ну есть семейство вирусов Корона.. вы думаете их по какому признаку друг от друга отличают?
Выделение и очистка вирусов
Основы молекулярной биологии вирусов и антивирусной терапии. Зинченко А.И., Паруль Д.А. – 2005Глава 2. Свойства вирионов
Выделение и очистка вирусов
Общая характеристика подходов к выделению и очистке вирусов
Выделение вирусов из зараженных клеток
Концентрирование и очистка вирусов
Критерии чистоты вирусных препаратов
Структурно-функциональная организация вирионов
Химический состав вирусов
Принципы вирусной архитектоники
Общая характеристика подходов к выделению и очистке вирусов
Физико-химическое изучение любого вируса, как правило, начинается с разработки метода его выделения и очистки. Обычно исходный материал представляет собой культуральную жидкость, тканевый экстракт и т.д. Во всех этих случаях вирус находится в смеси с большим количеством разнообразных балластных веществ – белков, пигментов, структурных компонентов клеток и т.п. Без удаления этих примесей невозможно проводить биохимические исследования вирусов.
Для очистки большинства вирусов с успехом применяют дифференциальное ультрацентрифугирование. Центрифугирование в градиенте плотности сахарозы делает возможным более тонкое разделение частиц, седимен- тационные свойства которых незначительно отличаются друг от друга. Методом равновесной седиментации в градиентах плотности цезиевых солей можно разделить частицы, обладающие различной плотностью.
В случае, если вирусы приходится выделять из больших объемов биологических жидкостей, прибегают к высаливанию сернокислым аммонием, осаждению органическими растворителями, осаждению в изоэлектрической точке. Наряду с этим используется ионообменная хроматография, гельфильтрация и т.д. Короче говоря, большинство методов, используемых для очистки белков, применимо и к вирусам. Однако существует и ряд специфических методов, применяемых для очистки только вполне определенных вирусов.
Например, миксовирусы можно очистить, используя их способность адсорбироваться на эритроцитах.
Общей схемы, пригодной для очистки любого вируса, в настоящее время не существует. Поскольку свойства вируса, так же как и химические свойства примесей, могут значительно варьировать у различных вируссодержащих материалов, то и выбор приемов очистки будет зависеть от каждого конкретного случая.
Высокоочищенные вирусы можно получить только благодаря применению целого ряда методов.
Идеальным методом выделения вирусов был бы тот, который обеспечил бы сохранение их биологической активности при полном разрушении клеточных компонентов и мембран. Однако такого метода нет. В зависимости от характера исходного материала и природы вируса приемы извлечения вирусов различны.
Выделение вирусов из зараженных клеток
Размалывание. Этот способ широко применяется в тех случаях, когда приходится работать с большим количеством вируссодержащего материала. Наиболее простым и почти универсальным приспособлением для размельчения нативной животной ткани является обычная или электрическая мясорубка.
Гомогенизация. Более основательное разрушение ткани достигается при помощи гомогенизаторов. Из препаративных гомогенизаторов наиболее популярны высокоскоростные смесители типа «Warring». Они снабжены стеклянными или стальными сосудами и набором четырехлопастных стальных ножей, которые соединены с мотором, способным вращаться со скоростью до 15 ООО об/мин. Единственным недостатком такого гомогенизатора является то, что развиваемое большое гидродинамическое воздействие в сочетании со вспениванием иногда инактивирует некоторые лабильные вирусы. Эти неблагоприятные условия исключаются при использовании гомогенизаторов, состоящих из двух деталей: толстостенной конусной пробирки и пришлифованного к ней пестика из стекла или тефлона. К сожалению, производительность таких гомогенизаторов незначительна (3-8 г ткани за цикл)
....
https://farmf.ru/lekcii/vydelenie-i-och ... -chistoty/
.
